| 第1幕 ユグノー戦争(ユグノー教徒＝新教徒 と カトリック＝旧教徒の争い)のさなか、ネヴェール伯爵(バリトン)が自宅で宴会を催し、彼がユグノー教徒の騎士ラウル(テノール)も招いたと言うので貴族たちが驚く。彼は「国王も新･旧教徒の和平を願っているのだ」と取り成して、現れたラウルに、余興に恋の歌を歌ってくれないかと頼む。ラウルが、ある日助けた名も知らぬ婦人に対する愛を歌うと、彼の従者マルセル(バス)も現れ、マルセルはユグノー兵士の歌「Piff, Paff」を歌い、面白い内容に皆は喜ぶ。そこへ急な来客としてネヴェール伯爵の許婚ヴァランティーヌ(ソプラノ)が来て、ネヴェール伯爵は席を立つ。彼女はマルグリット王妃が新･旧教徒の争いを収めるために、ユグノーの騎士との結婚を命じたので、ネヴェール伯爵との婚約を解消しなくてはならないと告げに来たのだ。他の客たちと一緒に婦人の姿を覗き見たラウルは、彼女こそ、いつか自分が助けて以来忘れられない婦人であることに気付くが、2人の様子から彼女がネヴェール伯爵の愛人だと思い込んでしまう。そこにマルグリット王妃の小姓ユルバン(メゾソプラノ)が、王妃の「今晩目隠しをして古い塔まで来るように」と書かれたラウル宛の手紙を持って来て渡し、ラウルは従う事にする。伯爵らはその手紙が王妃の直筆であることを認めて、ラウルに対する態度を改めて彼を見送る。
第2幕 マルグリット王妃(ソプラノ)の城館で、ヴァランティーヌが王妃に、ネヴェール伯爵との婚約は解消出来たが、父が新教徒との結婚を決して許さないだろうと伝えると、王妃は自分が口添えすると約束する。そこへ目隠しをされたラウルが通され、女官たちは凛々しい騎士の姿にため息をつき、王妃の命令で退く。王妃は、国王が旧教徒と新教徒の争いを収めるために、新教徒の長である貴方と、旧教徒のサン･ブリス伯爵の娘との結婚を望んでいるとラウルに話し、ラウルは承諾する。ネヴェール伯爵とサン･ブリス伯爵(バリトン)が登場し、王妃はラウルとサン･ブリス伯爵に、今回の結婚により両派が永久に平和であるように誓わせ、ヴァランティーヌをラウルに引き合わせる。思いがけない再会に驚く2人に、王妃は国の和平のため結婚するように願うが、ヴァランティーヌがネヴェール伯爵の愛人だと思い込んでいるラウルは、彼女とは結婚出来ないと言い、両派は互いに決闘だと叫び大混乱となる。
第3幕 パリ。居酒屋からはユグノーの兵士たちの合唱、教会からはカトリックの祈りの合唱が聞こえ、ジプシー娘たちはジプシーダンスを踊っている。ラウルとの結婚が取り止めになって、ネヴェール伯爵とその日結婚式を挙げたヴァランティーヌが、教会に1人残って祈りを捧げている時、ラウルの従者マルセルが、教会から出たサン･ブリス伯爵にラウルからの決闘状を渡す。サン･ブリス伯爵は部下に、このことはネヴェール伯爵には内密にするように言うと、部下は、ラウルを闇討ちにするので決闘をする必要はないと言う。それを聞いたヴァランティーヌは、顔にヴェールをかけてマルセルを探し、ラウルの危険を忠告するが、時すでに遅し、ラウルがやってきてしまう。マルセルがこれは罠だとささやくが、ラウルは逃げず、旧教徒の敵に囲まれてしまう。マルセルが叫んで助けを求めると居酒屋からユグノー兵士が出て来て、その場は新教徒と旧教徒の戦いになる。そこへ偶然通りかかったマルグリット王妃が両者に剣を収めさせて事情を聞く。マルセルが「ヴェールで顔を隠したその婦人が証人だ」と叫び、彼女がヴェールを取ると、それはサン･ブリス伯爵の娘ヴァランティーヌであった。ラウルはその女性をネヴェール伯の館で見たと言い、王妃がその日は自分が命じて婚約を解消に行かせたのだと初めて真実を告げる。しかしそこに元の婚約者ネヴェール伯爵が現れ、？ヴァレンティーヌと結婚式を挙げてしまったことを明らかにする。
第4幕 ネヴェール伯爵の館で、ヴァランティーヌが愛の無い結婚をしたことを嘆いていると、ラウルが最後の別れを告げに来る。父サン･ブリス伯爵と夫ネヴェール伯爵が来るので、彼女はラウルを隠し、彼らが鐘の音を合図に新教徒全員を虐殺する計画を話すのを聞く。ネヴェール伯は虐殺を拒絶するので、逮捕され、ヴァランティーヌは夫を尊敬する。皆が去った後、ヴァランティーヌはラウルを引き止め、愛を告白するが、ラウルは仲間に危険を知らせるためにバルコニーから飛び降りて行く。
第5幕 ラウルが新教徒たちの集う場所に駆けつけて、皆に危険を知らせるが、ユグノー教徒の惨事は始まってしまう。ヴァランティーヌは、ラウルと負傷したマルセルのいるユグノーの修道院に駆けつけ、命を救うためにラウルに改宗を勧めるが、彼は受け付けない。彼女は夫ネヴェール伯が殺害されたと告げ、自分がユグノーに改宗すると言い、マルセルから洗礼を受ける。パリまで逃げた3人は、サン･ブリス伯爵に見つかり、銃殺される。「誰だ」という問いに「ユグノー」と答えた3人の遺体に近づいた伯爵は、その1人が自分の娘であったことを知り愕然とし、幕が下りる。
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